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Como utilizar uma câmara de Neubauer ou Hemocitômetro?

- Contagem de células em câmara de Neubauer.

- Câmara de Neubauer utilizada para visualização em microscópio óptico.





O hemocitômetro (ou câmara de neubauer) é uma lâmina própria fabricada com duas subcâmaras para inclusão da amostra (Figura acima). A câmara é ututilizada para determinar a concentração de células numa amostra líquida. 

Ela é frequentemente utilizada para determinar a concentração de células do sangue, mas também a concentração de diversas outras amostras. A lamínula de vidro, que é colocada sobre a amostra, não simplesmente flutuar sobre o líquido, mas é mantida no lugar, a uma altura especificada (usualmente 0,1 mm). Além disso, uma grade é gravada no vidro da câmara de neubauer. Esta grelha (figura abaixo), um arranjo de quadrados de tamanhos diferentes, permite uma fácil contagem de células. Desta forma é possível determinar o número de células em um volume especificado.






O fluido contendo as células devem ser adequadamente preparada antes de o aplicar à câmara de neubauer.

1- O líquido deve conter uma suspensão homogénea. As células que ficam juntas em grupos são difíceis de contar e eles não estão uniformemente distribuídos (grumos celulares).

2- A concentração de células não deve ser muito elevada ou muito baixa. Se a concentração for muito elevada, então as células se sobrepõem e são difíceis de contar. A baixa concentração de apenas algumas células por resultados quadrados em um maior erro estatístico e é então necessário contar mais quadrados. As suspensões que têm uma concentração muito elevada deve ser diluído de 1:10, 1:100 e 1:1000. Uma diluição de 1:10 pode ser feita tomando uma parte da amostra e mistura-o com 9 partes de solução salina. A diluição deve ser posteriormente consideradas no cálculo da concentração final.



Contagem das células - Contagem do quadrado central (com mais divisões internas - ver figura acima) ou contagem dos quatro quadrados fora dos quadrados mais subdivididos - ver figura acima).

As células que se encontram na linha de uma grade requerem atenção especial. Células que tocam as linhas superior e direita de um quadrado não deve ser contadas, as células na parte inferior esquerda devem ser contadas (figura abaixo).


Contagem de células (quadrado central ou 4 quadrados das extremidades):

1 - Calcular o número de células em 1 ml: se houver 123 células em 10 ul (microlitros), em seguida, o número de células que existem em 1 ml (= 1000ul)? 
Fazemos proporção direta simples: 123 x 10 a quarta potência multiplicada pela diluição. Resultado - 1,23 x 10 a sexta potência/mL. ou 1.230.000 células por mL.



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